支原体清除试剂1(1000x)

使用方法

（一）支原体清除试剂 1

1. 使用之前，先将支原体清除试剂1用 PBS或者无血清培养液稀释10倍后，放 4℃冰箱保存。

2. 将 50-100万个细胞铺到 60mm的细胞培养皿内，加入4mL含支原体清除试剂1的正常细胞培养液（使用稀释 10倍后的支原体清除试剂 1，按 1:100 比例加入）。

3. 每 2-3天更换细胞培养液。换液时，用 PBS冲洗 2-3 遍细胞，以将死亡的支原体清洗干净。而后加入新鲜的含支原体清除试剂1的正常细胞培养液。期间如果细胞密度过大，请保持细胞密度适当（贴壁细胞可能需要yi酶消化），并更换新的培养皿。

4. 处理15天后，可以用支原体检测试剂盒进行检测，检测支原体是否杀灭。如果仍有支原体残留，可以考虑再处理6天。

5. 以后每隔1个月进行支原体的常规检测，以保证没有新的支原体污染。

l 建议将细胞分成三份：第一份添加清除试剂1，第二份添加清除试剂2，第三份同时添加清除试剂1和清除试剂2进行杀灭（注：同时添加两种药物可能对细胞的毒性较大，但是杀灭的概率会非常高）， 这样支原体对两种药物同时产生抗性和处理过程中细胞同时死亡的概率会非常低。如果同时添加清除试剂 1 和清除试剂 2，细胞可以每 2 天更换一次培养液。

l 处理过程中，注意每天观察细胞的状况，如果发现支原体清除试剂对细胞的毒性较大，可以加大培养液中的血清浓度或者提高细胞的密度。

l 清除试剂1和清除试剂2在降低浓度后（使用稀释10倍后的支原体清除试剂1或者 2，再按 1:500 比例加入，即药物的最终稀释比例为 1:5000）也可以加入到培养液中作为短期（1-2个月）的支原体污染预防药物，但是不建议在细胞培养液中长期（超过2个月）加入，因为有可能导致对该两种药物有抗性的支原体出现。