热不稳定性耐高盐核酸酶

无论是实验室规模样品制备、还是生产规模工艺过程，去除核酸都可以改善工艺流程，如蛋白纯化、病毒载体制备、mNGS中样品处理等过程。而核酸酶的选择，就显得特别重要。Heat Labile-Salt Active Nuclease (热不稳定性耐高盐核酸酶，HL-SAN) 是一种非特异性内切酶，在高盐浓度下具有最佳活性；且该酶在多种缓冲液中都有活性，很容易通过还原剂处理而失活。这些特性使HL-SAN在需要去除DNA和RNA的应用中，更为适合。

核酸污染，特别是宿主基因组DNA污染，在几乎所有工艺流程及生物制品的生产中，都是需要重点解决的问题。一方面，宿主DNA的存在，影响目标产物的纯化及下游质量分析等。另一方面，宿主DNA残留能引起机体严重的免疫反应，是生物制品的关键质量参数之一，FDA及NMPA等对Host Cell DNA (HCD)有严格的质控要求。宿主基因组DNA中，组蛋白与DNA形成核小体，核小体紧密折叠形成结构复杂的染色质。组蛋白与DNA间存在强烈的离子作用及疏水作用，再加上特殊的结构，导致宿主DNA很难被准确检测并清除。已有文献表明，高盐浓度下组蛋白与DNA解离相对彻di，这有利于宿主DNA的检测及去除。但市售的绝大多数核酸酶在高盐浓度下活性很弱，甚至wan全失活。而热不稳定性耐高盐核酸酶，HL-SAN成了这类应用的理想选择。

高盐条件下，DNA清除效率更高，宿主DNA残留更少；

pI为9.6，容易跟绝大多数蛋白分离；

还原剂存在时，酶易失活，减少对后续流程的影响。

图 1：高盐度溶液中的最佳活性。HL-SAN 在约 0.5 M NaCl 下具有最佳活性，但在 [NaCl] 和 [KCl] 的广泛范围内运行。HL-SAN 的活性在 25 mM Tris-HCl 缓冲液、pH 8.5、5 mM MgCl 2 和不同的 [NaCl] 或 [KCl] 中测试。最大活性设置为 100%。

图 2：温度和活动。HL-SAN 在 ~35°C 时具有最佳活性，但在很宽的温度范围内起作用（10°C 和 50°C 下的活性为 20%）。在含有 5 mM MgCl 2 和 0.5 M NaCl 的pH 8.5 的 25 mM Tris-HCl 缓冲液中测试 HL-SAN 的活性。

图 3： MgCl 2 和 MnCl 2 浓度对 HL-SAN 活性的影响。

在 25 mM Tris-HCl 缓冲液、pH 8.5、0.5 M NaCl 和不同浓度的 MgCl 2 或 MnCl 2 中测试 HL-SAN 的活性。将含有 5 mM MgCl 2的样品的活性 设为 100%。

图 4： HL-SAN 将 ssDNA 消化为 ~5-13 nt，将 dsDNA 消化为 ~5-7 nt。ssDNA 最终产物的大小从 ~5-13 nt 不等，而 dsDNA 被消化到大约 ~5-7 nt。最终产物的大小似乎取决于 DNA 序列。底物 1 和 2 是具有不同序列的 ssDNA，底物 3 和 4 是具有相似序列但在不同末端具有 FAM 标记的 dsDNA。底物 5 是 dsDNA，其序列与底物 3 和 4 相同，但两端带有 FAM 标记。

病原微生物检测应用，如宏基因组测序（mNGS）样品去除宿主DNA；

蛋白纯化，特别是DNA结合蛋白；

病毒载体制备，如腺相关病毒（AAV）、腺病毒（AdV）等；

其他需要去除宿主DNA的应用等。

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本产品主要用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

来源：在毕赤酵母中重组生产。

活性：HL-SAN在10-50°C的温度范围内具有高活性。 活动的最佳 NaCl 浓度为 0.5 M，工作范围为 0.25–1 M。活动需要 Mg2+ (>1 mM)。 工作 pH 范围为 7.5-9.5，最佳 pH 值为 9.0。

比活度：≥ 175 000 Units/mg。

单位定义：一个单位定义为在 37°C 下 30 分钟内 1 A 在 260 nm 处的吸光度增加，使用 50 μg/ml 小牛胸腺 DNA（D-1501，Sigma）在由 25 mM Tris-组成的缓冲液中 HCl，pH 8.5 (25°C)，5 mM MgCl2，500 mM NaCl。