1. Oligo(dT)
2. 随机引物
3. 基因特异性引物
PART 02
逆转录引物优劣势比较
引物类型 | 结合部位 | 优点 | 缺点 |
Oligo(dT) | 真核生物mRNA3’端poly(A)尾 | 可合成全长cDNA | 1、仅扩增有polyA尾的mRNA 2、对模板质量要求高 |
随机引物 | RNA的许多随机可结合部位 | 适合复杂结构和微量模板 | 特异性低,小片段多 |
基因特异性引物 | 特异性互补序列 | 特异性强,灵敏度高 | 仅合成特定的序列 |
PART 03
逆转录引物的选择
RNA类型:
1、真核生物mRNA
2、miRNA、核糖体RNA和tRNA等小RNA前体加A尾处理后的模板
Oligo(dT)
1、真核生物mRNA含有poly(A)尾,可以Oligo(dT)引物结合
2、miRNA、rRNA和tRNA本身无A尾,故需要人工处理后才能与Oligo(dT)引物结合
RNA类型:
1、rRNA、tRNA、原核生物mRNA等无3’端poly(A)尾的模板
2、长度比较长、有二级结构存在及微量样本的模板
随机引物
随机引物可以在任意位点和RNA结合并开始反转
RNA类型:
1、已知基因序列的模板
2、miRNA增加茎环结构的模板
基因特异性引物
1、针对特定序列设计的反转录引物
2、miRNA(茎环法)的反转录,需要根据基因序列设计对应的引物
【注】:为提高反转录效率,并保障获得更加完整的cDNA,建议将Oligo(dT)和随机引物混合使用。
PART 04
精品推荐
RNA类型 | 引物选择 | 原因 |
1、真核生物mRNA 2、miRNA、核糖体RNA和tRNA等小RNA前体加A尾处理后的模板 | Oligo(dT) | 1、真核生物mRNA含有poly(A)尾,可以Oligo(dT)引物结合 2、miRNA、rRNA和tRNA本身无A尾,故需要人工处理后才能与Oligo(dT)引物结合 |
1、rRNA、tRNA、原核生物mRNA等无3’端poly(A)尾的模板 2、长度比较长、有二级结构存在及微量样本的模板 | 随机引物 | 随机引物可以在任意位点和RNA结合并开始反转。 |
1、已知基因序列的模板 2、miRNA增加茎环结构的模板 | 基因特异性引物 | 1、针对特定序列设计的反转录引物 2、miRNA(茎环法)的反转录,需要根据基因序列设计对应的引物 |