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支原体污染会对细胞各个方面都造成不良影响，已经成为细胞培养中高度重视的问题，因此，定期进行支原体污染检测是十分必要的。本支原体检测试剂盒是采用PCR方法，特异性的检测各种培养细胞生物材料（如细胞培养物、实验动物分泌物、动物血清等）中支原体的污染。试剂盒使用的混合引物是针对支原体16s rRNA序列的保守区域设计的特异性引物，可直接使用细胞培养液作为PCR模板，特异性扩增支原体DNA，搭配配套的Mycoplasma PCR Mix（2×）一小时内即可完成，本试剂盒检测灵敏度高，可检测低至20个拷贝的支原体。
组成 | 78EA10015-50T |
Mycoplasma PCR Mix（2×） | 1 mL |
Mycoplasma Primer Mix | 100 μL |
Positive Control | 50 μL |
Mycoplasma Free Water | 1 mL |
1. 样品准备：取适量待检细胞培养上清于洁净的PCR管中，利用PCR仪95℃热处理5 min后作为模板。血清样本可利用无支原体去离子水水稀释后，取适量样本于洁净的PCR管中，利用PCR仪95℃热处理5 min后作为模板；
2. PCR体系配制：每次实验需设置阴性对照（将1 μL待检样品换成等量的无支原体去离子水）与阳性对照（在1 μL待检样品中加入0.5 μL Positive Control后一起作为Template），实验时戴一次性口罩与手套，谨慎操作，防止操作不当引入外源支原体污染；
3. PCR程序设置：
步骤 | 温度 | 时间 | 周期 |
Initial Denaturation | 98℃ | 2 min | 1 |
Denaturation | 98℃ | 20 s | 30 |
Annealing | 56℃ | 25 s | |
Extension | 72℃ | 10 s | |
Final extension | 72℃ | 5 min | 1 |
Hold | 4-16℃ | Forever |
4. 凝胶电泳：取10 μL PCR产物，使用1%琼脂糖凝胶进行电泳检测；
5. 结果分析：每次实验通过与阴性对照、阳性对照检测结果比较确认样品支原体污染情况，阳性条带大小500 bp左右。如阴性对照检测结果中有条带很有可能是P
CR体系中出现污染，建议重新实验确认结果。如有必要，也可对PCR产物进行常规测序，以确定具体的支原体种属。
| 货号 | 品名 | 规格 | 品牌 |
| 78EA10015-50T | PCR法支原体检测试剂盒 | 50T | Biohub |
