无机焦磷酸酶 （0.1 U/μL）说明书

无机焦磷酸酶 （0.1 U/μL）说明书

产品描述

本制品为利用大肠杆菌大规模发酵表达的 重组无机焦磷酸酶（酵母来源），可催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐：P2O7 4- +H2O+PPase→2HPO4 2- 。这是一个高放能的反应，自然条件下，无机焦磷酸酶可以为蛋白、RNA和DNA的生物合成反应提供热力学动力，并在脂代谢，钙吸收以及骨形成等生物转化过程中发挥作用。该酶在实验应用中能够高效发挥作用，保证反应的进行。在分子生物学中可用于反转录反应中提高RNA产量。

来源：重组E.Coli

分子量：63 kDa

纯度：≥95%

比活：0.1 U/μL

比活单位定义：标准反应条件下每分钟催化无机焦磷酸盐生成 1 μmol 磷酸盐所需的酶量定义为 1 个活性单位

存储缓冲液：20 mM Tris-HCl，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% 甘油， pH 8.0

质量保证

1. SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；

2. 酶动力学实时荧光法显示无RNA酶污染。

产品性质1. 无机焦磷酸酶是一种金属蛋白酶，达到最大活性需要 Mg 2+ 的参与；2. 热稳定性：最佳反应温度为 25 ℃，65 ℃ 10min 可使该酶失活；3. 反转录反应中提高RNA产量；4. 增强DNA复制能力。产品组分

产品应用1. 优化 RNA 转录：提高体外转录反应的 RNA 产量；2. 优化 PCR 反应：提高效率，增加 DNA 产量；3. 去除利用焦磷酸盐测定法来进行 SNP 基因分型的试剂中的 PPi 污染物；4. 促进蛋白质、RNA 和 DNA 的合成；5. 催化 PPi + H2O→2Pi 的反应；6. 作为反应缓冲液的组分用于氨酰化的测定，以对掺入tRNA的[3H]L-甲硫氨酸进行定量。运输和保存方法

干冰运输。-20℃保存，有效期一年。推荐分装保存，避免反复冻融。

应用实例1. 在RNase free的离心管中加入右侧表格中各组分配制反应体系；2. 将上述反应液混合均匀，低速离心至管底，37 ℃孵育4个小时。若转录本长度小于100 nt，增加反应时间至4-8个小时；3. 转录后取样品进行凝胶电泳，取样1 μL稀释到5 μL，然后用1%的琼脂糖凝胶进行检测，以确定转录是否成功；4. 反应完成后，加入DNase Ⅰ（RNase free），37 ℃孵育30 min以去除模板DNA。 注：（1）为了特定区域的有效转录，建议在其区域下游把模板DNA预先切成平端或5′突出末端。（2）反应体系于室温配置。由于10×Transcription Buffer 中含有亚精胺，低温下亚精胺浓度过高容易引起DNA模板沉淀，建议最后加入模板DNA。（3）建议在PCR仪中进行反应，为防止蒸发，建议开启热盖功能。（4）使用试剂、容器等无RNA酶污染。注意事项1、使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20 ℃保存；2、该酶在多种反应 Buffer 中均具有活性，通常该酶在 HDA、LAMP 等实验中，直接加入即可；3、该酶的用量在不同的实验中需要优化，通常在 0.05~1 U/ml 浓度调整；4、该酶的最佳反应温度为 25 ℃，其在 16~37℃均有活性，65 ℃ 10min 可使该酶失活；5、辅因子：Mg2+对于酶发挥活性是必须的。6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。7、本产品主要用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。