线性聚乙烯亚胺PEI MW25000说明书

BIOHUB 线性聚乙烯亚胺PEI MW25000 转染试剂系列是基于聚乙烯亚胺（Polyethylenimine，PEI）的产品，因其较高的转染效果，已广泛应用于AAV，LV和重组蛋白等工业化生产。

聚乙烯亚胺是一种具有较高阳离子电荷密度的有机大分子，每相隔两个碳原子，即每第三个原子都是质子化的氨基氮原子，使得聚合物网络在任何pH下都能充当有效的“质子海绵"体(proton sponge)，因此，非常容易结合带负电荷的核酸分子，形成带正电荷的复合物颗粒，该颗粒与细胞表面阴离子结合，很容易通过内吞作用进入细胞；并且可抵御溶酶体的降解作用，从而提高核酸分子的表达水平。

基本信息

CAS  9002-98-6

效期：3年

配置方法

转染操作流程：(贴壁细胞转染方法)

   1. 接种细胞： 转染前一天，用胶原酶（BIOHUB Cat#78CL10002)消化细 胞并计数（不建议用胰酶）。调整细胞浓度，将细胞铺入细胞培养的器皿，每个孔置 入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到 70~80%。

   2. 准备 DNA-PEI 复合物： DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升 至室温。依据表 1 所示，用 Opti-MEM ITM或其他适合的无蛋白培 养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线 性 PEI 转染试剂(这个需要客户自行摸索配比，每一批转染试剂和每一批 DNA 比例可 能会稍有不同）。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的线性 PEI 转染 试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI 复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。

   3. 转染细胞： 直接向每个孔中加入 DNA-PEI 复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在 无血清条件下转染时，去除生长培养基，替换成无血清培养基，然后滴 DNA-PEI 复合 物。转染 3 h 后，添加½体积的包含 30%血清的生长培养基。

   4. 孵育细胞和分析结果： 在 CO2 培养箱中 37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染 后最快 7 h 即可检测到转入基因的表达。

   5. 转染 24 h 后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释 10 倍 以上），在 CO2 培养箱中 37℃孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约 1~2 周可 筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

转染操作流程：(悬浮细胞转染方法)

   1. 转染前准备：悬浮细胞传代接种于适量含悬浮细胞生长培养基中，合适条件下培养。根据培养瓶大小调整细胞密度（例100mL培养瓶，1X10 ⁶ cells/mL），然后旋紧瓶口放入摇床继续培养，2~4小时后可以进行转染。

   2. 准备 DNA-PEI 复合物：DNA、PEI 试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室。用 Opti-MEM ITM或其他适合的无血清培养基稀释适量 DNA。用同样的培养基稀释 PEI 试剂。每 1 μg DNA 需用 1-5 μL 线性PEI转染试剂。一边轻轻涡旋装有 DNA 溶液的试管，一边将稀释的线性PEI转染试剂滴加至试管中（注意：请勿颠倒添加顺序）。充分混匀后，室温静置 10~25 min 以形成 DNA-PEI复合物。当溶液体积较大时，请用圆底聚丙烯管，例如 NEST 5 mL /14 mL 离心管。

   3. 转染细胞：将PEI-DNA转染复合物逐滴加入到细胞培养液中，摇匀后旋紧瓶口放回摇床合适培养条件下培养至可以分析检测。

   4. 孵育细胞和分析结果：转染后一般24-72h即可检测到转入基因的表达。 请自行确定适合的检测时间。

   5. 如果要获得更多的蛋白产量，有文献表明转染后24小时，可以适当稀释细胞，稀释比例参考范围（1:1—1:5）之间，可以增加蛋白产量，稀释效应与最佳稀释比率应根据经验确定。

    BIOHUB 生产的78Bio PEI是一种优化的线性阳离子聚合物转染试剂,分子量分别为 25000 和 40000，78BioPEI40000 相比 25000 转染效率高，但毒性也略大于 78PIE25000。在 HEK293 和 CHO 的蛋白表达系统中，相比于市面上的脂质体 78BioPEI 都表现出高的蛋白表达量（无 论是 96 孔板还是 100L 的细胞反应器），以及更小的细胞毒性、更高的转染效和更高的可 重复性，并且十分经济的高性价比转染试剂。产品具有以下特点：

1.转染效率高，细胞毒性低；  蛋白表达量高；

2.节约成本：BIOHUB 78 PEI转染试剂 ，进口品质，亲民价格，至少能够降 40% 的转染试剂总成本；

3.适用于 HEK293 等真核细胞的转染；

4.适用于贴壁细胞和悬浮细胞的转染；

5.适用于有血清和无血清的转染条件；

6. 无机试剂，无动物源成分；

7. 产品稳定，质控严格；

8. 工艺流程适用范围广，容易优化 适合小规模培养板，培养瓶到大规模的生物反应器。

产品反馈

 1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 2. 本产品主要用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

 3.加热或加酸都有助于 78BioPEI 溶解。当然酸可能不用加那么多，详细用量可试加一点 ,搅拌看看，足够溶解就行，不一定需要加到 pH 那么低。

 4.一定要溶解充分，溶解不充分会影响后续的转染效率.

 5.冷冻后可能会影响其后续转染效果。

 特别提醒：初次使用 78PEI 进行不同基因转染时应先做预试，优化出适合自己实验的， 最佳 PEI 和 DNA 的比例，通常筛选范围在 1:1 到 5:1 之间，如果之前用过Polysciences品牌的 PEI，我们的活性是其1.5倍左右，用 78BioPEI 时应适当降低使用浓度。