热敏UDG酶说明书

更新时间：2023-10-24 点击次数：282

产品详情

UDG酶可催化水解DNA中的尿嘧啶碱基与核糖之间的N-糖苷键，释放游离尿嘧啶碱基。本产品来源于大肠杆菌重组表达的嗜冷细菌的ung基因，分子量为 25KDa。本酶催化含尿嘧啶的单链和双链 DNA 释放游离尿嘧啶，对 RNA 无活性。本酶主要应用于防止PCR 扩增产物的交叉污染。它的作用原理基于：在 PCR 反应中以 dUTP 替代 dTTP 掺入 DNA 中，形成含 dU 碱基的 PCR 扩增产物，UDG 能选择性断裂单链和双链 DNA 中 dU 碱基的糖苷键，降解 PCR 扩增产物，消除上轮扩增产物对新样本的污染问题。

特点

Ø 25-37度范围内活性高，避免了ji端热敏UDG常温失活的缺陷；

Ø 本酶在60℃下热处理10分钟，完quan不可逆失活；

Ø 本酶的反应体系与Taq DNA聚合酶buffer相同，保证了活性体系的一致性。

浓度

1U/μl

活性定义

37℃反应条件下，每分钟催化 60 pmole尿嘧啶碱基从含尿嘧啶的双链 DNA 上释放所需要的酶量为 1 U。

活性测定条件

10 mM Tris-HCl (pH 8.3, 25°C), 20 mM KCl, 10 mM (NH4)2SO4, 0.01% Tween 20, 1.5 mM MgCl2 中，37℃ 温育。

酶贮存缓冲液

20mM Tris-HCl (pH 7.5), 100mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM DTT, 0.05% Tween 20, 50% glycerol。

产品包装规格及组成

Component	78DC10123-200U	78DC10123-1000U
热敏UDG	200U	1000U
10×UDG Buffer	0.4 ml×1	1.0 ml×1

运输与保存

-20℃保存蓝冰运输

适用范围

主要应用于防止PCR 扩增产物的交叉污染。作用原理基于：在 PCR 反应中以 dUTP 替代 dTTP 掺入 DNA 中，形成了含 dU 碱基的 PCR 扩增产物，UDG能选择性断裂单链和双链 DNA 中 U 碱基的糖苷键，降解 PCR 扩增产物，消除上轮扩增产物对新样本的污染问题。

应用举例

防止PCR产物污染的使用方法

1. 按如下表格配制PCR反应液

PCR组份	体积/μl	终浓度
10×Taq酶 Buffer	5	1×
dNTPs（2.0 mM）	5	0.2 mM
dUTP（2.0 mM）	1-5	0.04-0.2 mM
引物F（10 μM）	1.5	0.3 μM
引物R（10 μM）	1.5	0.3 μM
Template	1-5	/
热启动Taq聚合酶（2.5U/μl）	1.0	2.5U
热敏UDG（1U/μl）	1.0	1U
ddH2O	Varable	/
总体积	50	/

2. 37℃下反应10分钟。

3. 在95℃下热失活UDG 2分钟（此步骤可省略，直接进行PCR，预变性步骤会失活UDG）。

4. PCR反应。

质量控制

无内切酶活性：50 U的本酶和1 μg的pBR322 DNA在37℃下反应2小时，DNA的电泳谱带不发生变化。

品名	货号	规格	品牌
热敏UDG酶	78DC10123-200U	200U	BIOHUB
热敏UDG酶	78DC10123-1000U	1000U	BIOHUB

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